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大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
  • 發布日期:2009-10-28      瀏覽次數:1499
    • 大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)酶聯免疫分析(ELISA

      試劑盒使用說明書

      本試劑盒僅供研究使用。

      藥品名稱:

      通用名:大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)酶聯免疫分析試劑盒

      英文名:Rat  CGRP  ELISA   Kit

      使用目的:

      本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、或相關組織液中降鈣素基因相關肽(CGRP)含量。

      實驗原理

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)水平。用純化的大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入降鈣素基因相關肽(CGRP),再與HRP標記的羊抗鼠抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)的含量。

      試劑盒組成

      1

      20倍濃縮洗滌液

      30ml×1

      7

      終止液

      6ml×1

      2

      酶標試劑

      6ml×1

      8

      標準品(45ng/L

      0.5ml×1

      3

      酶標包被板

      12孔×8

      9

      標準品稀釋液

      1.5ml×1

      4

      樣品稀釋液

      6ml×1

      10

      說明書

      1

      5

      顯色劑A

      6ml×1

      11

      封板膜

      2 

      6

      顯色劑B

      6ml×1/

      12

      密封袋

      1

      標本處理及要求

      1.血清、血漿標本可直接測定;

      2.組織:取相關組織1g 5ml PBS中勻漿,室溫孵育5小時(期間不時旋渦混合)后,2000-3000/分離心10分鐘后,取上清液待測。

      3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

      4.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融。

      操作步驟

      1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;再各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后,在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉;再各取50μl分別加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃 度分別為 30          ng/L20 ng/L 10 ng/L5 ng/L2.5 ng/L)。

      2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。

      3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  

      4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

      5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

      6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

      7.         溫育:操作同3

      8.         洗滌:操作同5

      9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

      10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

      11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

       

      計算

        以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

      注意事項

      1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

      2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

      3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

      4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

      5.  嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

      6.本試劑不同批號組分不得混用。

      7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

      9.底物請避光保存。

      檢測范圍:

      2 ng/L -40 ng/L

      規格:

      96人份/

      保存條件及有效期

      1.試劑盒保存:2-8

      2.有效期:6個月

       

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