辣根過氧化酶使試劑中的發光物（luminol）氧化并發光，而試劑中含有增強劑這使得發光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復雜的蛋白混合物經sds-page分離，并轉移到固相膜上（如nc、pvdf）等，用于免疫學檢測，經HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應。
原理
辣根過氧化酶使試劑中的發光物（luminol）氧化并發光，而試劑中含有增強劑這使得發光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復雜的蛋白混合物經sds-page分離，并轉移到固相膜上（如nc、pvdf）等，用于免疫學檢測，經HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應。當加入免疫印跡化學發光試劑后，luminol發生氧化降解，并發射波長為428nm的光，此光可經x光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。
用途
非放射性發光系統，用于檢測固定在膜上的蛋白，其敏感性達1-5pg。用x光片可快速地獲得永.久的硬拷貝結果。所含獨.特的底物足以維持12小時以上的發光，便于反復曝光操作，免疫印跡膜經抗體脫卸處理后可供再次抗體探查使用。適用于痕量蛋白或核酸檢測。
使用方法
1. 印跡膜制備 按常規方法完成SDS-PAGE和電轉膜操作，適當的封閉非常重要。可以通過標記一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交聯物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要，在與HRP交聯物溫育后，膜片更需仔細洗滌，所有步驟均在室溫下完成。
