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(提示:10-1為10的負(fù)一次方，即0.1;10-2為10的負(fù)二次方，即0.01)

第一步：系列稀釋

樣品稀釋液的制備 準(zhǔn)確稱取待測樣品10g，放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20min，使微生物細(xì)胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液;再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液;再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液;以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。

用稀釋平板計(jì)數(shù)時(shí)，待測菌稀釋度的選擇應(yīng)根據(jù)樣品確定。樣品中所含待測菌的數(shù)量多時(shí)，稀釋度應(yīng)高，反之則低。通常測定細(xì)菌菌劑含菌數(shù)時(shí)，采用10-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細(xì)菌數(shù)量時(shí)，采用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數(shù)量時(shí)，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數(shù)量時(shí)，采用10-2、10-3、10-4稀釋度。

第二步：涂步平板

平板接種培養(yǎng) 平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。

(1)混合平板培養(yǎng)法 將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號(hào)碼，每一號(hào)碼設(shè)置三個(gè)重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號(hào)10-9的3個(gè)平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號(hào)10-8的3個(gè)平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號(hào)10-7的3個(gè)平板中(由低濃度向高濃度時(shí)，吸管可不必更換)。然后在9個(gè)平板中分別倒入已融化并冷卻至45-50℃的細(xì)菌培養(yǎng)液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平板，使菌液與培養(yǎng)液混合均勻，冷凝后倒置，適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。

(2)涂抹平板計(jì)數(shù)法 涂抹平板計(jì)數(shù)法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號(hào)，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對(duì)號(hào)接種在不同稀釋度編號(hào)的瓊脂平板上(每個(gè)編號(hào)設(shè)三個(gè)重復(fù))。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，每個(gè)稀釋度用一個(gè)滅菌刮鏟，更換稀釋度時(shí)需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時(shí)，也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20-30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。