ELISA試劑盒操作較繁雜,在操作中應留神以下5個方面：
1. 跟著病況的進展或由其他因素影響，某些抗體在機體內的含量發作大幅動搖，因此有必要對標本進行預處理。間接法測定中，標本恰當稀釋還可下降非特異性反響。
2. 加樣一般運用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標本、加酶結合物、加底物和加間斷液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。
3.在成批手藝檢測中，還應留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留神可能會導致過錯效果或定量不準。
4. 洗刷是ELISA試劑盒操作過程中決議實驗勝敗的一個關鍵步驟。目的是除掉未結合的免疫反響物，間斷抗原抗體反響，除掉標本中與反響無關的成分、游離的酶標物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質。
5. 斷定效果須運用ELISA試劑盒測讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據反響液顏色的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反響孔的吸光度值。酶標儀具有杰出的重復性。
